核酸提取和纯化,对检测结果的影响

早在公元前2-3世纪,中国和印度就有了关于病毒所导致的疾病---天花的记录,直到19世纪末,病毒才开始逐渐被发现和鉴定。目前,对于新冠疫情的检测,使用体外诊断核酸检测方法仍是不可或缺的手段。


核酸是分子生物学的基础,而核酸提取是核酸检测,乃至于整个分子行业绕不过去的门槛,很多时候一份样本的核酸提取的好坏直接决定了检测结果的有效性。


核酸提取的主要步骤:

01
裂解细胞

去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,如提取DNA分子时,应去除RNA,反之亦然。


02
沉淀核酸

纯化核酸,去除盐类,有机剂等杂质,一般可以把核酸提取方式主要分为三类:溶液型抽提柱式抽提磁珠纯化法


随着基因检测、个性化给药等普及,生物行业各个领域都追求高通量、高纯度的今天,磁珠法纯化提取核酸的优势更加明显 磁珠技术作为是运用较为广泛的核酸提取方式。磁珠法与PCR法联合使用,在高效提取核酸的同时,使气溶胶污染概率大大降低,能有效防止实验容易出现假阳性的问题。


说到磁珠法,那我们首先当然必须得了解磁珠,什么是磁珠呢?磁珠是利用一定的组织包被四氧化三铁核心而形成的可以被磁铁吸附的同时有能通过表面包被物吸附(结合)核酸的神奇的小珠子。



▲ 磁珠法核酸提取原理示意图


磁珠法是通过裂解液裂解细胞组织样本,从样本中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附携带核酸的磁珠移动至不同的试剂槽内,通过反复快速搅拌、混匀液体,经过细胞裂解、核酸吸附、洗涤与洗脱等步骤,最终得到纯净的核酸。核酸纯化的方法是影响所提取核酸质量的重要因素,只有高质量的核酸才能满足下游的各种应用。


如何获得更优质的核酸提取结果?

除了选择合适的提取方式,严谨的实验操作之外,无菌、高品质的实验室小耗材也值得精心挑选!SP Bel-Art为DNA/RNA浓缩纯化过程提供必要的工具,保证提取核酸的质量。



01
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ProCulture微量均质器-手持式

快速处理一对多样品的理想选择,配套的塑料研棒无DNase,RNase。




液氮冷却微型研钵和研杵套件

通过在微型离心管中均匀化来保护样品质量,减少样品损耗和采集时间。



02
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磁珠分离架

可拆卸套管,更有效地传输液体;50ml和15/5ml型号的独立管套使液体的添加和去除更容易;不同规格可供选择:1.5ml至50ml型号的管套上的弹簧柱塞允许珠子沿管壁以不同高度分离;目前该款明星产品正在申请专利。




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过滤原代培养物时尽量减少样品损失,使用方便防止污染。




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在培养箱外保持理想的细胞温度。培养皿在培养箱外放置更长时间;保护细胞活力;减少细胞压力,使胰蛋白酶等酶有效地发挥作用。




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易于使用,可控制冷冻速度,大约每分钟-1°C;适用于1.0/1.8ml的试管,18位。


03
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PrepSafe微型离心管微型浮动架

在工作台上工作,在水浴中漂浮;离心管被紧密地固定,确保不会弹出;将支架的支腿压在工作台上,可松开管子,便于拆卸;开放式支架使试管与水接触最大,以便更好地控制样品的温度。